多重置換擴(kuò)增(MDA)技術(shù):REPLI-g Mini Kit Print 采用先進(jìn)的多重置換擴(kuò)增技術(shù) 。該技術(shù)以隨機(jī)六聚體為引物,在 phi29 DNA 聚合酶的作用下,從多個(gè)起始位點(diǎn)同時(shí)對(duì)基因組 DNA 進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增。phi29 DNA 聚合酶具有強(qiáng)鏈置換活性和高保真性,能夠持續(xù)延伸 DNA 鏈,將整個(gè)基因組 DNA 均勻擴(kuò)增。這種擴(kuò)增方式避免了傳統(tǒng) PCR 擴(kuò)增可能出現(xiàn)的偏好性問(wèn)題,保證了擴(kuò)增產(chǎn)物能夠真實(shí)反映原始基因組的組成,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供可靠的 DNA 樣本。
均一性擴(kuò)增保障:通過(guò)優(yōu)化的反應(yīng)體系和嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件控制,試劑盒確保了全基因組范圍內(nèi)的均一性擴(kuò)增 。在擴(kuò)增過(guò)程中,無(wú)論是高 GC 含量區(qū)域,還是低拷貝數(shù)的基因片段,都能得到有效擴(kuò)增,避免了某些區(qū)域過(guò)度擴(kuò)增或擴(kuò)增不足的情況。這種均一性擴(kuò)增特性使得科研人員能夠從微量樣本中獲取完整、準(zhǔn)確的基因組信息,滿(mǎn)足多種下游實(shí)驗(yàn)對(duì) DNA 樣本質(zhì)量和數(shù)量的要求。
高產(chǎn)量擴(kuò)增:即使是僅含 10 pg DNA 的微量樣本,REPLI-g Mini Kit Print 也能將其擴(kuò)增至微克級(jí) 。以單細(xì)胞為例,經(jīng)該試劑盒擴(kuò)增后,可獲得足夠用于全基因組測(cè)序、基因芯片分析等實(shí)驗(yàn)的 DNA 量。這種高產(chǎn)量擴(kuò)增能力,極大地拓寬了微量樣本的應(yīng)用范圍,使科研人員能夠充分挖掘珍貴樣本的潛在價(jià)值。
高保真性:phi29 DNA 聚合酶的高保真特性使得擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性得到了有效保障 。經(jīng)該試劑盒擴(kuò)增的 DNA,堿基錯(cuò)誤率極低,能夠準(zhǔn)確反映原始樣本的基因組序列信息。在進(jìn)行基因變異檢測(cè)、遺傳分析等對(duì)序列準(zhǔn)確性要求的實(shí)驗(yàn)時(shí),高保真性的擴(kuò)增產(chǎn)物可確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性,避免因擴(kuò)增錯(cuò)誤導(dǎo)致的誤判。
廣泛的樣本適用性:該試劑盒可兼容多種類(lèi)型的樣本,包括新鮮組織、冷凍組織、FFPE 樣本、血液、唾液、單細(xì)胞等 。無(wú)論是臨床研究中的病理樣本,還是基礎(chǔ)科研中的特殊細(xì)胞樣本,都能通過(guò) REPLI-g Mini Kit Print 進(jìn)行有效擴(kuò)增。此外,對(duì)于降解的 DNA 樣本,該試劑盒也能實(shí)現(xiàn)較好的擴(kuò)增效果,為處理復(fù)雜樣本提供了有力支持四、應(yīng)用領(lǐng)域
單細(xì)胞研究:在單細(xì)胞生物學(xué)研究中,REPLI-g Mini Kit Print 發(fā)揮著重要作用 。通過(guò)對(duì)單細(xì)胞基因組進(jìn)行擴(kuò)增,科研人員可以深入研究細(xì)胞間的遺傳異質(zhì)性,揭示細(xì)胞分化、發(fā)育以及疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制。例如,在腫瘤單細(xì)胞研究中,利用該試劑盒擴(kuò)增腫瘤單細(xì)胞 DNA,有助于發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的特異性基因突變,為腫瘤的精準(zhǔn)診斷和個(gè)性化治療提供新的靶點(diǎn)。
古 DNA 與法醫(yī)樣本分析:對(duì)于古生物樣本和法醫(yī)樣本,往往存在樣本量少、DNA 降解嚴(yán)重的問(wèn)題 。REPLI-g Mini Kit Print 能夠從這些有限的樣本中擴(kuò)增出足夠的 DNA,用于古 DNA 研究中的物種進(jìn)化分析以及法醫(yī)鑒定中的個(gè)體識(shí)別、親緣關(guān)系鑒定等工作。通過(guò)對(duì)古 DNA 的分析,可追溯生物的進(jìn)化歷程;在法醫(yī)領(lǐng)域,準(zhǔn)確的 DNA 分析結(jié)果為案件偵破提供了關(guān)鍵證據(jù)。
臨床診斷與疾病研究:在臨床診斷中,該試劑盒可用于從少量的臨床樣本(如穿刺活檢組織、外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞等)中擴(kuò)增 DNA ,進(jìn)行疾病相關(guān)基因的檢測(cè)和分析,輔助疾病的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及治療方案的制定。在疾病研究方面,通過(guò)對(duì)患者樣本 DNA 的擴(kuò)增和分析,有助于深入了解疾病的發(fā)病機(jī)制,發(fā)現(xiàn)潛在的治療靶點(diǎn),推動(dòng)新型治療方法的研發(fā)。
樣本準(zhǔn)備:根據(jù)樣本類(lèi)型,按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?。對(duì)于組織樣本,需進(jìn)行研磨、裂解等操作;對(duì)于細(xì)胞樣本,需確保細(xì)胞的完整性和活性。處理后的樣本應(yīng)盡快進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),若不能及時(shí)實(shí)驗(yàn),需妥善保存,避免樣本降解。
實(shí)驗(yàn)操作流程:使用 REPLI-g Mini Kit Print 進(jìn)行全基因組擴(kuò)增的操作流程較為簡(jiǎn)便 。首先,將樣本 DNA 與試劑盒中的反應(yīng)緩沖液、phi29 DNA 聚合酶等試劑混合均勻,然后在恒溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后,通過(guò)純化步驟去除反應(yīng)體系中的雜質(zhì),即可獲得高質(zhì)量的擴(kuò)增產(chǎn)物。整個(gè)操作過(guò)程無(wú)需特殊的儀器設(shè)備,常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備即可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需求。
存儲(chǔ)條件:為保證試劑盒的性能,REPLI-g Mini Kit Print 應(yīng)存儲(chǔ)于 -20℃環(huán)境中 。在使用過(guò)程中,盡量避免反復(fù)凍融,取用試劑后需及時(shí)放回冰箱保存。同時(shí),要注意試劑盒的有效期,在有效期內(nèi)使用以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
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